(一)蛋白質電泳
1.請參照常規電泳操作.
2.分子量標準:
可選擇普通分子量標準或預染的分子量標準.在選擇預染的分子量標準時,要注意其優點和缺點:
優點: 在電泳過程中可監控蛋白質分離狀態; 可指示轉印中蛋白質的轉印效率.
缺點: 染料影響蛋白質移動速度;分子量測定略欠精確;影響蛋白質與膜的結合力.
購買信息:
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中范圍蛋白質分子量標準(14.3-97.4KD)
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V5235S
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200μg
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國產
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80元
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分子量大小:（14.3、21.5、31、40、42.7、55、66.2、97.4KD）
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中范圍蛋白質分子量標準(24-97KD)
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MTB087-1
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20次
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國產
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80元
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分子量大小:（24、36、53、66、97KD）
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低范圍蛋白質分子量標準（6.5-66KD）
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M3913-1
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20次
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Sigma
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280元
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低范圍蛋白質分子量標準（6.5-66KD）
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M3913-1
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5×20次
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Sigma
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1198元
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分子量大小:（6.5、20、24、29、36、45、66KD）
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高范圍蛋白質分子量標準（36-205KD)
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M3788-1
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20次
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Sigma
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280元
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高范圍蛋白質分子量標準（36-205KD)
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M3788-1
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5×20次
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Sigma
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1198元
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分子量大小:（36、45、55、66、84、97、116、205KD）
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寬范圍蛋白質分子量標準（6.5-205KD)
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M4038-1
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20次
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Sigma
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280元
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寬范圍蛋白質分子量標準（6.5-205KD)
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M4038-1
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5×20次
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Sigma
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1266元
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分子量大小:（6.5、14.2、20、24、29、36、45、55、66KD）
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預染的低范圍蛋白質分子量標準(18-80KD)
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20次
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自產
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320元
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預染的低范圍蛋白質分子量標準(18-80KD)
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50次
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自產
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680元
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分子量大小: 80, 60, 39, 23, 18 kDa
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預染的中高范圍蛋白質分子量標準(20-210KD)
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20次
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自產
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320元
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預染的中高范圍蛋白質分子量標準(20-210KD)
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50次
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自產
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680元
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分子量大小:210, 140, 106/102, 80, 52, 20 kDa
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預染的中高范圍蛋白質分子量標準(18.3-210KD)
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26681
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48次
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Pierce
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1214元
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a)膜的選擇:主要采用 NC膜和PVDF膜,其比較如下:
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NC膜
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PVDF膜
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物理強度
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差
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好
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蛋白質結合能力
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80-100ug/cm2
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100-200ug/cm2
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溶劑耐受力
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無
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有
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考馬斯亮蘭染色
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否
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可以
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ECL檢測
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稍差
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可以
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快速免疫檢測
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否
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可以
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SDS存在下蛋白質結合
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差
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好
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質譜分析
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否
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可以
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b)膜的大小: 請根據膠的面積來確定.
c)膜的孔徑: 0.45μm適用一般蛋白質.0.2μm適用小分子蛋白質.
購買信息:
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66485
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硝酸纖維素膜,0.45um,30cmX3m/卷
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美國Gelman
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1395元/卷
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硝酸纖維素膜,0.45um,20cmX20cm
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美國Gelman
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80元/張
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硝酸纖維素膜,0.45um,20cmX20cm
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國產
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30元/張
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60207
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尼龍膜, 0.45um,30cmX3m/卷
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美國Gelman
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2310元/卷
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尼龍膜, 0.45um,20cmX15cm
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美國Gelman
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90元/張
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尼龍膜, 0.45um,直徑100mm,50張/盒
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國產
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260元/盒
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66543
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PVDF膜, 0.45um,30cmX3m/卷
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美國Gelman
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1690元/卷
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PVDF膜, 0.45um, 直徑100mm,50張/盒
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國產
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260元/盒
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蛋白質染色的染料有很多種,各種的特點均不一樣.
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蛋白質靈敏度
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影響免疫檢測
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Ponceau-S Red麗春紅
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5ug
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無
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快綠Fc
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5ug
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無
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Sypro Rose
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1-2ng
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無
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氨基黑10B
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1ug
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有
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考馬斯亮蘭R-250
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500ng
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有
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印度墨
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100ng
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有
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膠體金
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4ng
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有
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Ponceau-S Red麗春紅
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Sigma原裝
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10g
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182元
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快綠Fc
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Amresco分裝
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25g
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258元
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氨基黑10B
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Sigma分裝
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10g
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168元
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考馬斯亮蘭R-250
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Amresco分裝
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10g
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168元
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蛋白銀染試劑盒
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自產MTB083-1
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10次
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188元
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SDS-PAGE蛋白快速染色試劑
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自產
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25次
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100元
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Western Blot 膜可逆染色劑
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自產
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100ml
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100元
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有各種不同的免疫檢測方法.請注意選擇.方法不同,則所需的試劑也不同.如需方便,可選擇完整的試劑盒.
A.封閉膜:
這一步會影響結果的成敗和背景的強度.常用封閉劑為BSA和Tween20.脫脂干奶粉不適合用于糖蛋白和生物素標記抗體.
購買信息:
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牛血清白蛋白組份五BSA
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Amresco分裝
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25g
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280元
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Tween 20
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Amresco分裝
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500ml
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150元
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Western Blot 膜封閉劑
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自產
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100ml
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100元
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B.一抗: 根據目的蛋白質選擇.單抗或多抗均可.注意已變性蛋白質無法檢測,必須采用非變性膠電泳.我司有 R&D,Genex,Santa Cruz等公司的原裝抗體或進口分裝抗體.具體請參見免疫學部分產品----**抗體.
C.標記二抗: 根據一抗的來源選擇二抗.
購買信息: 請參見免疫學部分試劑---各種標記抗體
D.底物系統: 采用常規底物或化學發光底物.
(1)顯色法: 常用底物為BCIP/NBT或DAB .此法簡單,但靈敏度不高,并難以從膜上去除.
(2)化學發光法: 目前比較常用的方法.靈敏度較高,檢測時可采用X光膠片或CCD成像系統.
不同顯色方法產品比較如下:
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廠家
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靈敏度
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方法
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SuperSignalâ West Pico 化學發光底物
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美國Pierce
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皮克級
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化學發光法
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SuperSignalâ West Dura 持久性化學發光底物
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美國Pierce
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低飛克級
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化學發光法
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SuperSignalâ West Femto 高靈敏度化學發光底物
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美國Pierce
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飛克級
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化學發光法
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ECL Kit
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Amersham
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飛克級
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化學發光法
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BCIP/NBT (AP酶)
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100pg
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顯色法
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DAB (HRP酶)
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100pg
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顯色法
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SuperECL Plus Western Blotting 超敏發光液
采用獨特的發光底物系統，是世界上**靈敏的ECL Western Blot 化學發光試劑。用于Western Blotting 條帶的熒光發光，檢測直接或間接標記辣根過氧化物酶HRP 的抗體及其關聯的抗原。由兩種溶液組成，使用前混合。SuperECL Plus 超敏發光液，價格低廉，靈敏度大大高出Amersham 和Santa Cruz 公司同類ECL 產品100 倍以上，也明顯高出Pierce 的SuperSignal West Pico 化學發光系統數倍，但背景更干凈，發光時間持久，可以長達10 小時以上。
特別適用于豐度極低而一般ECL 系統難于檢測的目的蛋白。
特點如下：
ж 靈敏度極高，可檢測10-100 fg 抗原。
ж 高信噪比，背境干凈。
ж 發光迅速。
ж 發光持續12小時以上。
ж 可在日光燈下進行發光操作。
ж 節省抗體(一抗1:2000－1:6000；二抗1:4000－1:10000)。
ж 儲存條件：4℃避光儲存一年，偶爾室溫放置數周不影響質量。
購買信息
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產品名稱
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規格
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編號
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價格
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SuperECL Plus Western Blotting 超敏發光液
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10ml
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P1010-10
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138
|
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25ml
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P1010-25
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266
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100ml
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P1010-100
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880
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美國Pierce公司化 學 發 光 底 物 系 列
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SuperSignalâ 底物家族提供一系列的底物，適合免疫印跡的多種靈敏度要求。
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SuperSignal@ West Pico 化學發光底物
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特征
優點
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經濟：比任何其它化學發光底物產品花費更少。
更長發光時間：強光發射超過一個工作日，獲得你想要曝光次數。
高強度：信號比其它基于發光胺的系統強兩倍。
皮克級靈敏性：高度靈敏性可快速顯色較寬水平范圍內的蛋白質。
優良的穩定性：24小時工作溶液穩定性；在運輸條件環境下**少可穩定1年。
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SuperSignal@ West Dura 持久性化學發光底物
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特征
優點
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24小時發光時間：比任何其它改良的HRP化學發光底物提供的要長10倍；為發表質量的印跡提供更多的曝光
極好的靈敏度：具**的10-15 克級靈敏度
節省抗體：使用Super Signal â West Dura 伸展持續期底物比用其它化學發光底物，抗體稀釋度可高得多。
立即產生強烈信號，易被膠片或化學發光檢測系統檢測
工作濃度**少穩定24小時；試劑盒在運輸條件下可穩定**少一年
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SuperSignal@ West Femto **高靈敏度化學發光底物
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特征
優點
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釋放由化學發光系統產生的**強信號；使膠片或圖象儀系統成像更容易達到可能檢測蛋白質的**低限：10-15 克
經濟：使寶貴的一抗稀釋度可達1/100,000
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Lumi-PhosTM West Blotting 化學發光底物
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PIERCE 基于堿性磷酸酶檢測系統的化學發光底物，其同時具有兩個特色：高強度信號和較低的背景。
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定貨信息
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目錄號
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產品名稱
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包裝
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價格
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SuperSignalâ West Pico化學發光底物
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|||
|
34080
|
SuperSignalâ West Pico Chemiluminescent Substrate
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500ml
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2178
|
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34077
|
SuperSignalâ West Pico Chemiluminescent Substrate
|
100ml
|
647
|
|
34079
|
SuperSignalâ West Pico Chemiluminescent Substrate Trial Kit
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50ml
|
383
|
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SuperSignalâ West Dura持久性化學發光底物
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34075
|
SuperSignal® West Dura Extended Duration Substrate
|
100ml
|
3643
|
|
37071
|
SuperSignal® West Dura Extended Duration Substrate Trial Kit
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20ml
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805
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SuperSignalâ West Femto**高靈敏度化學發光底物
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34095
|
SuperSignal® West Femto Maximum Sensitivity Substrate
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100ml
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3828
|
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34094
|
SuperSignal® West Femto Maximum Substrate Trial kit
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20ml
|
950
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4.Western Blotting檢測試劑盒
我們開發了此步免疫檢測的完整的試劑盒,即HRP標記的二抗檢測系統(含封閉液,洗液,底物,HRP/親和素-二抗),您只需準備好一抗,并選擇和一抗動物來源相應的試劑盒就可以.對于實驗來說,采用完整的試劑盒可以避免各種試劑的不匹比而帶來的結果不理想.
Western Blotting DAB顯色法檢測試劑盒
試劑盒的內容：
（1）封閉試劑：10g蛋白質干粉2包。
（2）濃縮抗體稀釋液：20ml×2瓶，為10倍濃縮液。
（3）過氧化物酶標記二抗。1ml。效價1：200―400
（4）DAB濃縮液10ml(×40倍)
購買信息:
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Western Blotting DAB顯色kit（大鼠IgG）
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SA2023
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國產
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盒
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550元
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Western Blotting DAB顯色kit（山羊IgG）
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SA2021
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國產
|
盒
|
550元
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Western Blotting DAB顯色kit（兔IgG）
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SA2022
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國產
|
盒
|
550元
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Western Blotting DAB顯色kit（小鼠IgG）
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SA2020
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國產
|
盒
|
550元
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SuperSignal West Pico His蛋白Western檢測試劑盒
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15168
|
Pierce
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盒
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3268元
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CL-Xposure X 光膠片(5”x7”)
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34090
|
Pierce
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100張
|
1054元
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CL-Xposure X 光膠片(8”x10”)
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34091
|
Pierce
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100張
|
2121元
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柯達X 光膠片(5”x7”)
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合資
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100張
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200元
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