一、注意事項

1.  清洗厚薄兩塊玻片：初次使用需要用酒精棉球擦拭干凈。經常使用用自來水沖洗干凈后，再用單蒸水沖洗，晾干。也可用酒精擦拭。

2.  取合適大小，容器將各液體依次加入，在加AP和TEMED前將玻璃片放入casting frame 做成glass plate sandwich，放在水平桌面上鎖定后，固定在casting stand上，注意垂直放置，壓緊底面的膠條，以防漏液。
 

二、常見問題及解答

1.  兩快玻璃板之間灌膠，膠為什么總是不平？

（1）  你的玻璃洗干凈沒有？應該要洗得非常干凈！

（2）  過硫酸銨和TEMED的加量不合適，加量相對較多，凝膠凝固過快也會膠不平，**多按照分子克隆加倍。

（3）  加完試劑以后沒有很好的搖勻，導致有些部位的聚合劑濃度過高，聚合相對較快造成膠不平。

（4）  稍微注意手法，均勻加入。

（5）  灌膠后應該用水或者正丁醇壓膠面或用20%的乙醇封頂（沒有毒性可以除氣泡，使用效果極好）。戰友小新723認為：“**天灌膠后，用乙醇直接壓，待乙醇揮發完畢后，上面加一層水，第二天電泳用，效果很好。不用正丁醇，乙醇比正丁醇效果要好多了”。

（6）  邊緣膠是不容易聚合完全的，灌完膠后要立即加無水正丁醇覆蓋，濃度越低的膠越不要使用雙蒸水壓頂，另外還可以在壓頂試劑如正丁醇中添加少許AP來增加邊緣膠的凝聚強度

（7）  溫度也是影響膠聚合的重要因素，我們有些同學為了讓膠更快的凝固而把膠放到50度的溫箱，由于受熱不均勻，造成膠聚合不均勻。

2.  膠為什么總是漏？

（1）  每次電泳完后，洗凈玻璃、膠條和其它附件，下次用之前，用75%酒精擦拭玻璃和膠條，能有效防漏，且利于剝膠。

（2）  避免玻璃邊緣（與膠條接觸處）破損很重要，尤其是下面和膠條接觸的地方。

（3）  關鍵是找一塊很平的桌面，使兩塊玻璃底面非常齊就行了。

（4）  膠條一定要干，跑完電泳后，膠條就放在實驗臺上晾著。

（5）  下面的膠條注意不要老化，如果有裂紋的話用保鮮膜墊在上面，也可以有效防止漏膠，或者反過來用。

（6）  玻璃在使用過程中容易造成小的缺口，從而導致封條無法完全密封，裝好架子后，在玻璃底邊上抹上一層薄薄的凡士林就好了，兩邊多點（容易從兩邊漏）這樣就不會漏了，就算是用了很久的很多小缺口的玻璃都沒有問題，然后轉移到電泳槽的時候，去掉封條，把底上的凡士林擦干就OK了（注意，一定要擦干凈，尤其是少量進入了兩隔玻璃之間空腔的，贏偉凡士林不導電，會影響第2相的效果的。

（7）  你可以在海綿墊下再墊一些紙，使得它與玻璃貼的更緊密。或者在玻璃底部用瓊脂糖封上。

（8）  因為兩塊玻板沒有放的完全對齊，底部不在同一個平面，所以封條封不嚴，重新對齊后就不漏了。以后每次只要在水平的桌面上仔細對齊兩塊玻板，再夾緊。用手感覺一下確定在同一平面上后，放到灌膠架并壓在封條上，卡緊。注意兩邊均勻用力，一般不會再漏。

（9）  先把兩塊玻片放在夾子上，不要加緊，放到架子上，使兩塊玻片的底部對齊，夾緊兩塊玻片，然后取下再在其下面墊上墊片，這樣一般就不會漏膠了。但是如果你放了墊片再對齊玻片底部，或者在桌子上對其玻片底部然后放到架子上的話，經常會漏膠

3.  條帶跑得比正常的窄？

（1）可能因為膠凝的不均勻，聚合的不是很好，灌膠的時候盡量混勻。

（2）是不是有窄有寬？可能與你拔梳子的時候有關，拔梳應該迅速，沖洗加樣孔的時候要小心，以免把上樣帶扭曲；膠配好了用槍吹幾下再灌膠，還有就是要等指示劑跑到兩層膠交界成一線時，再調高電壓。

（3）可能是你樣品的問題，如果鹽濃度較高，便會擠壓其它條帶，致使條帶寬窄不一，由于同樣的原因，樣品在凝膠中的速度會很慢，造成條帶走的較慢，好像與你的預想不一致。

（4）常見的原因是：每孔上樣量不均勻，應確保每孔中上樣量一致。

（5）可能是系統的ph出了問題，有可能是你的電極緩沖液，也有可能是凝膠緩沖液，更新緩沖液看看，看是否能成功。